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生物制品的純度和雜質(zhì)分析

提供者:上海斯邁歐分析儀器有限公司   發(fā)布時間:2024/7/22 14:46:00  閱讀次數(shù):0次   進入該公司店鋪

電荷變異體分析

電荷異構(gòu)體分析是生物治療蛋白質(zhì)藥物的一項監(jiān)管要求。這些大的異質(zhì)分子在生產(chǎn)過程中歷經(jīng)多種酶促翻譯后修飾,例如糖基化 和 Fc 段賴氨酸切除。此外,在純化和儲存過程中可發(fā)生多種化學修飾,例如氧化和脫酰胺。蛋白質(zhì)電荷的均一性對蛋白藥物結(jié) 構(gòu)、穩(wěn)定性、親和力和療效有著非常重要的影響。離子交換電荷異構(gòu)體分析是一種高分辨率技術(shù),在分析這些異構(gòu)體時非常有用。 ICH Q6B 等法規(guī)中規(guī)定使用蛋白質(zhì)電荷異構(gòu)體圖譜分析法。

 


基于 Orbitrap Fusion Lumos 平臺的簡單快速抗體藥物天冬氨酸異構(gòu)化解析 與小分子藥物相比,單抗藥物更易在生產(chǎn)、運輸和儲存的過程中,發(fā)生各種翻譯后修飾的變化,影響藥物分子的穩(wěn)定性,同時影 響蛋白的結(jié)構(gòu)和功能。 由于異構(gòu)化本身不會引起分子量和電荷的變化,因此大大增加分析的難度。在完整蛋白的水平上,可以使用離子交換和親和色譜 進行天冬氨酸異構(gòu)化分析,不過對于低豐度的異構(gòu)化水平就無法準確確定。本方法使用 Thermofisher 納升級液相和的三合 一超高分辨質(zhì)譜儀 Orbitrap Fusion Lumos,采用 ETD 碎裂方式,建立了天冬氨酸異構(gòu)化質(zhì)譜解析方法,可以廣泛的應用到常規(guī) 抗體藥物肽段的精細解析中。 通過設(shè)置脫酰胺化后修飾和查找包含天冬氨酸異構(gòu)化的特征碎片離子,在該抗體的酶解肽段中,*終準確鑒定到發(fā)生天冬氨酸異 構(gòu)化的肽段有兩條,第yi條發(fā)生天冬氨酸異構(gòu)化的肽段為 VVSVLTVLHQDWLNGK,其中第 14 位的 N 發(fā)生了脫酰胺化,并且在 該過程中,產(chǎn)生了異構(gòu)化的天冬氨酸;第二條包含異構(gòu)化位點的肽段為 GFYPSDIAVEWESNGQPENNYK,其中第 14 和第 19 位 的 發(fā)生了脫酰胺化,并且在該過程中,第 14 位的天冬酰胺發(fā)生了異構(gòu)化。

 

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